在微生物研究中，稀有菌株(如環(huán)境樣本中占比<0.1%的功能菌、臨床樣本中的低豐度病原體或工程菌庫(kù)中的特定突變株)的分選一直是關(guān)鍵挑戰(zhàn)。傳統(tǒng)方法(如平板劃線、流式細(xì)胞術(shù))受限于低通量、依賴熒光標(biāo)記或?qū)?fù)雜樣本的適應(yīng)性差，難以高效捕獲目標(biāo)。近年來(lái)，??微滴微流控技術(shù)??憑借其單細(xì)胞級(jí)操控、高通量及低試劑消耗的優(yōu)勢(shì)，成為稀有菌株分選的前沿解決方案。
一、技術(shù)原理與核心優(yōu)勢(shì)
微滴微流控通過(guò)微通道將水相樣本(含微生物懸液)與油相包裹形成納升級(jí)至皮升級(jí)的獨(dú)立微滴(體積約1-100 pL)，每個(gè)微滴可包埋單個(gè)或多個(gè)微生物細(xì)胞，形成“微型反應(yīng)器”。其核心優(yōu)勢(shì)在于：①??超高通量??：微滴生成頻率可達(dá)數(shù)千至數(shù)百萬(wàn)個(gè)/秒，遠(yuǎn)超傳統(tǒng)流式分選的每秒數(shù)百個(gè)；②??單細(xì)胞隔離??：微滴的物理分隔避免了細(xì)胞間競(jìng)爭(zhēng)或信號(hào)干擾，尤其適合稀有菌的低背景檢測(cè)；③??靈活標(biāo)記??：可通過(guò)熒光(如表達(dá)特定蛋白)、代謝活性(如底物代謝發(fā)光)或物理特性(如大小、電導(dǎo)率)實(shí)現(xiàn)目標(biāo)菌株的間接標(biāo)記。
針對(duì)稀有菌株的低豐度特性，當(dāng)前研究主要采用兩類策略：
1.熒光觸發(fā)分選??：通過(guò)基因工程使目標(biāo)菌株表達(dá)熒光蛋白(如GFP)，或利用特異性熒光探針標(biāo)記(如針對(duì)特定代謝酶的底物)，微滴生成后經(jīng)熒光檢測(cè)器識(shí)別陽(yáng)性微滴(含目標(biāo)菌)，再通過(guò)介電泳力或微閥技術(shù)將其分離至收集通道。該方法適用于已知靶標(biāo)的精準(zhǔn)分選，但需預(yù)先改造或標(biāo)記菌株。
2.功能響應(yīng)分選??：無(wú)需預(yù)先標(biāo)記，依賴目標(biāo)菌的特別功能(如降解污染物、分泌特定代謝物)。例如，在微滴中加入待降解底物，目標(biāo)菌代謝后產(chǎn)生熒光產(chǎn)物(如熒光素)，通過(guò)檢測(cè)微滴熒光強(qiáng)度篩選功能陽(yáng)性微滴。此方法更適用于未知菌株的功能挖掘，但需優(yōu)化微滴內(nèi)營(yíng)養(yǎng)供給與信號(hào)放大。
三、挑戰(zhàn)與未來(lái)方向
當(dāng)前技術(shù)仍面臨微滴穩(wěn)定性控制(如油相揮發(fā)導(dǎo)致微滴融合)、低豐度目標(biāo)(<0.01%)的檢測(cè)靈敏度不足、以及復(fù)雜樣本(如土壤懸液含顆粒雜質(zhì))的堵塞風(fēng)險(xiǎn)等問題。未來(lái)發(fā)展方向包括：①開發(fā)新型穩(wěn)定劑與表面活性劑提升微滴長(zhǎng)期穩(wěn)定性；②結(jié)合單細(xì)胞測(cè)序或拉曼光譜實(shí)現(xiàn)無(wú)標(biāo)記多功能分選；③集成微流控芯片與自動(dòng)化設(shè)備，推動(dòng)從實(shí)驗(yàn)室研究到工業(yè)化應(yīng)用的轉(zhuǎn)化。
總之，微滴微流控技術(shù)為稀有菌株分選提供了高效、靈活的新工具，有望在環(huán)境修復(fù)、生物醫(yī)藥及合成生物學(xué)等領(lǐng)域發(fā)揮關(guān)鍵作用。
